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HPV DNA 检测新方法:以致癌基因E6/E7作靶点,避免漏检

发布时间: 2017-06-13
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宫颈癌简介

宫颈癌是女性最常见的恶性,其死亡率仅次于。近年来,宫颈癌的发展趋势逐渐偏向年轻化且呈逐年上升现象。人乳头瘤病毒( HPV)感染与宫颈癌有高度相关性,是宫颈癌的主要致病元凶,研究表明99.7% 的宫颈癌患者存在HPV感染。因此,宫颈癌筛查至关重要。宫颈癌筛查项目中,临床上以HPV检测和TCT检查较为常见。

HPV基因组介绍

HPV是一种双链的小DNA病毒,具有7900个碱基对,由病毒蛋白外壳和核心DNA物质构成,无包膜。病毒基因组分为3个部分:早期基因区(E)、晚期基因区(L)及将早期区与晚期区分开的长调控区(LCR)。调控区主要调控病毒的转录,控制病毒蛋白和感染颗粒的产生。早期区编码E6、E7、E1、E2、E4和E5蛋白质,主要参与病毒DNA的复制、转录。晚期区编码L1、L2蛋白质,分别是病毒的主要和次要衣壳蛋白。

E6、E7基因的致癌机理

早期区(E区)编码蛋白基因中,由E6、E7基因编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子,编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子,这两种蛋白与细胞内两种主要抑癌蛋白和pRb的结合以及调控可以明显改变细胞生长周期和DNA修复,由此导致的基因组不稳定性是细胞转化和永生化的必要条件,见下图。

 HPV DNA 检测新方法:以致癌基因E6/E7作靶点,避免漏检

                                                     HPV导致宫颈病变的过程图示

在CIN I期及之前,HPV主要以游离状态存在于宿主细胞中,在病变进一步发展的过程中,HPV基因组会整合到宿主细胞基因组,随着病变程度的增加,HPV最终以整合状态存在。整合之后,L1基因常常丢失,而E6/E7基因持续存在。

L1 与E6/E7分别作为检测靶点的区别

从低级别病变发展为癌的过程中,HPV基因组会发生整合。在整合过程中,E6/E7基因持续存在,L1基因可能会丢失,有漏检风险。

· 对56个浸润性宫颈癌组织活检样本分别用L1区通用引物和E6-E7分型引物进行检测比较发现,有23个样本存在L1区缺失。

· 研究发现,HPV 18的L1/E1区更容易丢失。几乎所有的HPV18阳性的宫颈癌中病毒基因组整合到人基因组上;而HPV16阳性的宫颈癌中也有≤60%的病毒基因组发生整合[4]。

· 一项基于15,774例病人样本的研究发现,跟型别特异性E6/E7引物PCR比较,通用引物MY09/11 PCR检测会造成10。9%(522例)的漏检;409例由MY09/11 PCR检测结果为阴性的病人中,随访发现最终有104人(25。4%)发展为CIN2+[5]。

相对于以L1基因作靶点,以E6/E7基因作检测靶点,可以避免由于HPV基因组整合到人基因上造成的漏检。因此,致癌基因E6/E7更适合作为HPV DNA检测的靶点。

 

 

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